基因療法一直被認(rèn)為有能力治療遺傳病，但是在實(shí)際的應(yīng)用中一直存在問題，即健康的基因只能在幾周內(nèi)發(fā)揮作用，最終只能對基因進(jìn)行短暫恢復(fù)。

　　在近幾年進(jìn)行病毒運(yùn)送基因到細(xì)胞的研究中，曾有人實(shí)現(xiàn)通過運(yùn)送健康基因達(dá)到減輕病癥的效果，但是一直無法實(shí)現(xiàn)將基因準(zhǔn)確插入到指定的DNA位置。

　　CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)能夠解決這項(xiàng)難題。雖然CRISPR/Cas9在如今的使用中仍然存在問題，但是和其他基因編輯技術(shù)相比，它能夠?qū)崿F(xiàn)基因編輯的重組。在使用過程中，科學(xué)家通過指定CRISPR/Cas9對應(yīng)的靶DNA片段，以及要取代的DNA序列和取代的DNA序列，實(shí)現(xiàn)最終的基因編輯。

　　CRISPR/Cas9還需解決的問題是尋找DNA的位置問題，針對這個問題，已經(jīng)存在將CRISPR/Cas9和病毒運(yùn)送方法進(jìn)行結(jié)合，利用CRISPR/Cas9作為導(dǎo)航員和編輯器，在CRISPR/Cas9到達(dá)靶位置上時，實(shí)現(xiàn)基因序列的插入的研究。該研究人員表示，在利用CRISPR/Cas9實(shí)現(xiàn)病毒靶向時候，如果在不太活躍的DNA片段進(jìn)行，能夠降低基因編輯帶來的潛在風(fēng)險。

　　CRISPR/Cas9這一被稱為“魔剪”的基因編輯工具在基因工程應(yīng)用方面被寄予厚望。但是，脫靶效應(yīng)這一有爭議的老問題一直影響著CRISPR/Cas9系統(tǒng)的應(yīng)用。

　　有文獻(xiàn)報(bào)道，CRISPR/Cas9的切割是通過gRNA與基因組位置之間20bp堿基的配對，且配對堿基的 5′ 端需要有PAM結(jié)構(gòu)，再引導(dǎo)Cas9作用實(shí)現(xiàn)的，但是CRISPR/Cas9與靶位點(diǎn)識別的特異性主要依賴于gRNA與靠近PAM處10-12bp堿基的配對，而其余遠(yuǎn)離PAM處8-10bp堿基的錯配對靶位點(diǎn)的識別影響不明顯，這項(xiàng)研究直接說明了CRISPR/Cas9存在嚴(yán)重的脫靶性，即該技術(shù)可以發(fā)生非特異性切割，引起基因組非靶向位點(diǎn)的突變，這樣會造成研究結(jié)果的不確定性。

　　去年在Nature Methods雜志上發(fā)表的研究“Unexpected mutations after CRISPR-Cas9 editing in vivo”通過全基因組測序分析表明CRISPR基因編輯會引入數(shù)百種不可預(yù)估的突變到基因組中，文章所指出的大規(guī)模脫靶問題，對CRISPR的應(yīng)用提出了尖銳的挑戰(zhàn)，卻又在今年3月30日出現(xiàn)反轉(zhuǎn)并進(jìn)行了撤稿處理。值得注意的是，這篇文章的第一作者Kellie A Schaefer和共同第一作者Wen-Hsuan Wu均同意撤稿，而包括通訊作者Alexander G Bassuk以及Vinit B Mahajan在內(nèi)的其余四位作者則不同意撤稿。這與通常的撤稿情況還是有所不同，一般的撤稿大多數(shù)情況貌似都是通訊作者要撤稿，這篇爭議性文章通訊作者則堅(jiān)持了自己的意見。顯然，這篇文章在研究者們內(nèi)部也有巨大分歧。

　　同時，也有一些研究表明，CRISPR的脫靶問題沒有這些研究表示的那樣嚴(yán)重：bioRxiv期刊上的研究“Whole genome sequencing of multiple CRISPR-edited mouse lines suggests no excess mutations.”指出，一些采用CRISPR/Cas9技術(shù)進(jìn)行基因編輯的小鼠品系經(jīng)過全基因組測序后的結(jié)果顯示，CRISPR/Cas9技術(shù)能夠在生物水平上對基因組實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)編輯，同時沒有造成很多的脫靶突變。

　　從這些研究可以分析，在中對CRISPR/Cas9技術(shù)進(jìn)行應(yīng)用時，脫靶效應(yīng)仍然需要列入考慮中。